BVD-Diagnostik: Zehn gute Gründe für VIROTYPE® BVDV

1. Bewährter Test für die BVD-Diagnostik

VIROTYPE® BVDV ist ein real-time RT-PCR Testkit zum sicheren Nachweis des Bovinen Virusdiarrhoe- Virus (BVDV). Der Test ist in Deutschland und in der Schweiz zugelassen.

2. Geprüfte Qualität - Made in Germany

LDL – Labor Diagnostik Leipzig arbeitet nach höchsten Qualitätsstandards, abgesichert durch GMP- und GLP-Richtlinien. Die Bereiche Forschung, Entwicklung und Produktion sowie der Vertrieb unserer in-vitro-Diagnostika sind zertifiziert nach DIN EN ISO 9001:2008.

3. Sicheres Testverfahren

VIROTYPE® BVDV ermöglicht den sicheren Nachweis des Erregers der Bovinen Virusdiarrhoe mittels real-time RT-PCR in Vollblut, Plasma, Serum, Milch und Ohrgewebeproben (Einzel- oder Poolproben) vom Rind.

Aufgrund der hohen Sensitivität von VIROTYPE® BVDV können Blutproben (Vollblut, Plasma, Serum) in Pools aus bis zu 50 Einzelproben, Ohrgewebeproben in Pools aus bis zu 25 Einzelproben sowie Milchproben in Pools aus bis zu 100 Einzelproben getestet werden. LDL´s VIROTYPE® TLR Lysepuffer erlaubt darüber hinaus die einfache und kostengünstige Aufarbeitung von Ohrgewebeproben ohne aufwendige RNA-Extraktion.

WiederkäuerProduktinfo VIROTYPE® BVDV (Update Oktober 2011!)
Gebrauchsanleitung VIROTYPE® BVDV (Update Februar 2011)
Gebrauchsanleitung VIROTYPE® TLR Lysepuffer (April 2011)

4. Hohe Spezifität und Sensitivität

VIROTYPE® BVDV ist als panpesti real-time RT-PCR konzipiert, d.h. detektiert spezifisch virale RNA des Genus Pestivirus. Die Sonde ist in einer hochkonservierten Region des 5’ nicht-translatierten Bereichs (5´NTR) des Genoms positioniert und zeigt sehr gute Übereinstimmungen mit allen bekannten Pestivirus-Spezies.1

Mit VIROTYPE® BVDV werden sowohl die Genotypen 1 und 2 des Bovinen Virusdiarrhoe-Virus (BVDV 1, BVDV 2), als auch die atypischen Pestiviren HoBi und Giraffe nachgewiesen.
Kreuzreaktionen mit anderen Erregern sind nicht bekannt.  

Die hohe analytische Sensitivität des VIROTYPE® BVDV wurde mit einer Titrationsreihe von BVDV-in vitro RNA [2x108 Kopien/µl] unter Verwendung von 10-fach Verdünnungen nachgewiesen. Mit VIROTYPE® BVDV können darüber hinaus noch 1-10 Kopien pro Ansatz detektiert werden.
Die eingesetzte RNA-Kopienzahl korreliert sehr gut mit den Amplifikationsergebnissen.
Der Korrelationskoeffizient beträgt 0,997.    

5. Sicherer Nachweis von BVDV bei Kälbern in der diagnostischen Lücke

Nur die real-time RT-PCR gewährleistet den sicheren Nachweis von BVDV bei Kälbern in der diagnostischen Lücke. Beim Antigen-ELISA können dagegen persistent infizierte Tiere als falsch negativ diagnostiziert werden, was den Sanierungserfolg gefährdet.2  

Bei Ohrgewebeproben werden nach Schnelllyse vorwiegend persistent infizierte Tiere detektiert. Persistent infizierte Tiere können somit anhand der Höhe des Ct-Wertes für das BVDV-Fluoreszenzsignal von transient BVDV infizierten Tieren abgegrenzt werden. Teure Nachuntersuchungen von positiven Tieren mit Ct <30 können entfallen.3  

Mehrere Untersuchungen zeigen darüber hinaus, dass mit dem ERNS-ELISA bei Kälbern nach Aufnahme von Kolostrum falsch-negative Ergebnisse vorkommen können.4,5  

6. Einfache Testdurchführung mit Ohrgewebeproben

•   Keine Probenvorbereitung erforderlich
•   Geringe Arbeitszeit und wenig Arbeitsschritte
•   Keine komplizierten Testbedingungen
•   Ohrgewebeproben können im Ohrstanzbehälter belassen werden oder aus dem
     Probenbehälter entnommen und in ein Probenröhrchen verbracht werden
•   200 µl gebrauchsfertiger Lysepuffer für Ohrstanzprobe hinzugeben, Inkubation nur 45 Minuten
•   Probenlysate können direkt zum PCR-Mastermix hinzugegeben werden 

Im Gegensatz zum ELISA liegt für die Mehrzahl der Proben das Ergebnis
bereits am ersten Tag vor.  

VIDEO: Automatisiertes Verfahren der Labor Diagnostik Leipzig für den schnellen Nachweis von RNA des Bovinen Virusdiarrhoe-Virus (BVDV) aus Ohrstanzproben

7. Geprüfte Chargenqualität und Haltbarkeit

LDL - Labor Diagnostik Leipzig stellt Chargen mit einer Mindesthaltbarkeit von neun Monaten bereit. Die Haltbarkeit ab Produktion beträgt 18 Monate.  
Chargenprüfprotokolle liegen jedem Testkit bei und müssen nicht separat aus dem Internet heruntergeladen werden. Darüber hinaus ist ein ausführlicher Validierungsreport vorhanden und steht beispielsweise für die Akkreditierung des Testkits im Labor zur Verfügung.

Untersuchungen mit Ohrgewebeproben in Entnahmegefäßen verschiedener Ohrmarkenhersteller (u.a. Caisley, AllFlex) zeigten eine sichere Detektion des BVD-Virus nach 3 Wochen Lagerung der Ohrgewebeproben bei Raumtemperatur sowie nach einer Woche bei 37°C.  

8. Bestens geeignet zur BVD-Sanierung in Deutschland

Tierseuchenbekämpfungsprogramme werden in Deutschland seit mehr als 10 Jahren überwiegend mit real-time PCR Testkits durchgeführt. Dabei werden Einzel- und Poolproben getestet, wie z.B. bei BTV, BVDV, CSFV und Influenza.  

VIROTYPE® BVDV real-time RT-PCR ist für die BVD-Sanierung in höchstem Maße geeignet und hat seit seiner Markteinführung 2007 in vielen Laboren den BVDV ERNS-ELISA ersetzt. Allein in der Schweiz werden über 70% aller Untersuchungen von Ohrgewebeproben auf BVD mittels real-time PCR durchgeführt.

Anzahl der BVD-AG-Untersuchungen mit PCR und ELISA in der Schweiz

Abb. 1: Kälber- und Überwachungsphase (Rinder geboren ab 1. Oktober 2008 - September 2010)

 

Etabliert

Das real-time RT-PCR Verfahren ist in den meisten Veterinäruntersuchungsämtern in Deutschland etabliert und die entsprechende Geräteausstattung ist vorhanden.

Flexibel

BVDV-RNA ist in Vollblut, Serum-, Plasma-, Milch- und Ohrgewebeproben nachweisbar und die Proben können ohne arbeits- und zeitaufwendige  Probenaufarbeitung sowohl manuell als auch teil- oder vollautomatisiert analysiert werden.  

Hocheffizient

VIROTYPE® BVDV zeichnet sich durch eine hohe Wirtschaftlichkeit aus. Beispiel: Probendurchsätze bei der BVD-Sanierung mit VIROTYPE® BVDV und einer Laborkraft.


Minimiertes Kontaminationsrisiko

Durch die Verwendung der VIROTYPE® BVDV one step single tube RT-PCR ist das Kontaminationsrisiko minimiert.    

Kostengünstig

Die RT-PCR Methode ist eine kostengünstige Alternative zur Einzeluntersuchung mittels ELISA. Der Probenansatz erfolgt als Pool von bis zu 25 Ohrgewebeproben. In Deutschland kann von einer durchschnittlichen PI-Prävalenz von unter 0,5%7 ausgegangen werden, so dass die Anzahl positiver Pools gering ist.    

Verfügbar

Für die BVDV-Untersuchung mittels RT-PCR gibt es mehrere zugelassene Testsysteme. 
Der BVDV ERNS Antigen ELISA hingegen ist patentiert, d.h. es gibt nur einen Anbieter. Labore, die sich für dieses Testsystem entscheiden, machen sich hinsichtlich der Kosten und der Verfügbarkeit von einem Anbieter abhängig. Diese Nachteile mussten viele deutsche Untersuchungslabore bereits am Beispiel IBRgE- und PRRS-ELISA erfahren.    

Methode der Zukunft

Die real-time RT-PCR zur Untersuchung von Pool- und Einzelproben ist die Methode der Zukunft in der Veterinärdiagnostik. CSFV, Influenza und BTV werden in Deutschland bereits mit dieser Methode untersucht.

Umweltschutz 

Während bei der Untersuchung mittels BVDV Antigen ELISA große Mengen
Probenverdünner, Waschlösung, Konjugat, Substrat- und Stopplösung teuer gelagert sowie entsorgt werden müssen, verursacht VIROTYPE® BVDV deutlich weniger Aufwand und Abfall.  

Verfügbarkeit & Logistik 

LDL – Labor Diagnostik Leipzig gewährleistet die sichere Bereitstellung von Testkits für das BVD-Bekämpfungsprogramm. Die Produktion in Deutschland ermöglicht kurze Wege. Wartezeiten und Zollprobleme, wie sie bei der Einfuhr aus Nicht-EU-Staaten wie den USA oder der Schweiz vorkommen, entfallen.  

9. Mehr als nur ein Testkit

LDL – Labor Diagnostik Leipzig bietet Komplettlösungen für die sichere BVD-Diagnostik an. 

Der von von uns erhältliche BVDV Pool-Manager ermöglicht unter anderem die einfache Ansteuerung der Laborautomaten, das einfache Erstellen und Auflösen von Pools und das Tracking der Proben-ID.
Die Software kann auch für andere Pool-PCR-Untersuchungen eingesetzt werden.
Darüber hinaus steht Ihnen ein kompetenter deutschsprachiger technischer Service für Softwarefragen zur Seite.  

10. Wir sind für Sie da!

LDL – Labor Diagnostik Leipzig ist verlässlicher Partner in Analyse, Diagnostik und Entwicklung für die Veterinärmedizin. Wir bieten umfassenden Service rund um jedes VIROTYPE® BVDV Testkit. Persönlich, kompetent und einfach erreichbar. Wir freuen uns auf Ihren Anruf oder Ihre E-Mail.

Referenzen

VIROTYPE® BVDV real-time PCR ersetzt zunehmend andere Methoden zum BVDV-Nachweis.
Labore in und außerhalb Deutschlands verlassen sich auf die hohe Qualität des VIROTYPE® BVDV real-time PCR-Testkits. Dazu zählen u.a.:

Labor Zentral - AG für Veterinärmedizinische Diagnostik, Schweiz
Tiergesundheitsdienst Bayern e.V.
LUA Sachsen
Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern

Literatur

1  B. Hoffmann, K. Depner, H. Schirrmeier and M. Beer (2006) A universal heterologous internal control system for duplex real-time RT-PCR assays used  in a detection system for pestiviruses Journal of Virological Methods, Volume 136, Issues 1-2, Pages 200-209

2  Fux, R., C. Pfahler, M. Hellwig, R. Birlbauer, G. Wolf (2008): Ohrgewebediagnostik von BVDV-PI-Kälbern: Ist eine Sensitivität von 100% möglich? Arbeitskreis für veterinärmedizinische Infektionsdiagnostik (AVID), 27. Arbeits- und Fortbildungstagung Virologie, Bad Staffelstein/Kloster Banz, 17. - 19. 09.

3   Schroeder C, Gaunitz C, Dierchen B, Labitzke M, Gabert J (2009) Testing Mini-Ear Samples for BVDV – Experiences from Germany,  American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians, San Diego  

4  Fux R, Wolf G (2010) BVDV-Diagnostik: Neues zum Einfluss maternaler Antikörper auf die Hautgewebeanalytik, Arbeitskreis für veterinärmedizinische Infektionsdiagnostik (AVID), 29. Arbeits- und Fortbildungstagung Virologie, Bad Staffelstein/Kloster Banz, 15. - 17. 09., Tagungsunterlagen, S. 27-28

5  Christian, J, Kupča, A, Drdlicek, J, Bogner, K. H. (2010): Fallbericht eines mittels ERNS-ELISA in der Ohr- stanze negativ untersuchten BVD-Virämikers, Arbeitskreis für veterinärmedizinische Infektionsdiagnostik (AVID), 29. Arbeits- und Fortbildungstagung Virologie, Bad Staffelstein/Kloster Banz, 15. - 17. 09

6  Bundesamt für Veterinärwesen BVET (2010), Schweiz

7  Brendel TS (2005): Prävalenz und weitere epidemiologische Betrachtungen der Bovinen Virus Diarrhoe (BVDV)-Infektion in bayrischen Rinderherden, Dissertation LMU München